1.1 样品

螺旋藻多糖,市售。黄褐色粉末。人体推荐用量为1日1.0g,按60kg体重折算成0.017g-kg-1.

1.2 实验动物和细胞来源

ICR小鼠,雌性,共200只,体重为17~21g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,生产许可证号:SCXK (沪) 2012-0002。实验动物房合格证号:SYXK (闽) 2013-0003。动物室温度:22℃~25℃,相对湿度:55%~70%。YAC- 1细胞,由中科院上海生命科学院细胞资源中心购入。

1.3仪器与试剂

1.3.1仪器

Heraeus低温高速离心机、Biorad550酶标仪、 Thermo二 氧化碳培养箱、岛津uv2450紫外分光光度计、 ESCO A2生物安全柜、莱卡倒置显微镜、Mettler AE200电子天平、96孔培养板 (corning)。

1.3.2试剂

刀豆蛋白A (Con A)、MTT (sigma) , Giemsa染液、Hanks液 (p H 7.2~7.4)、PBS缓冲液(p H 7.2~7.4)、RP-MI1640细胞培养液(杭州吉诺医药生物科技有限公司) ,小牛血清(Gibco)。

1.4实验方法

实验动物按体重随机分成20组,每组10只每四组为一实验组, 每组试验按人日推荐用量的5倍、10倍和30倍分别设0.085、 0.17、0.51gkg-1三个剂量组和蒸馏水空白对照组。动物每天按20m Lkg-1体重连续灌胃30天后，测定免疫指标。分别为免疫一组:小鼠碳廓清试验;免疫二组:迟发型变态反 应(DTH)检测;免疫三组:抗体生成细胞检测Jerne改良载片法)和小鼠血清溶血素的测定;免疫四组:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)和脏器/体重比值;免疫五组:Con A诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)。均按文献方法进行操作。

1.5实验数据统计方法

实验数据以SPSS 17.0软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验,方差齐的实验数据采用LSD法进行统计,差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

2.1螺旋藻多糖对小鼠体重胸腺指数和脾指数的影响

螺旋藻多糖对各剂量组小鼠的体重增长值与对照组比较差异均无显著性(P>0.05) ,即该样品对小鼠的体重增长无影响。各剂量组脾指数、胸腺指数与对照组比较均无显著性差异(P>0.05) (见表1)。

表1 螺旋藻多糖对胸腺指数、脾指数的影响(0±5)

2.2螺旋藻多糖对细胞免疫功能的影响

样品高、中、低剂量组与对照组相比，左右耳肿胀度差,脾淋巴细胞转化活性均无显著性差异(P>0.05) ,结果(见表2) ,提示本实验条件下螺旋藻多糖对小鼠脾淋巴细胞转化和迟发型变态反应能力均无明显促进作用。

表2 螺旋藻多糖对细胞免疫功能的影响(0±s)

2.3螺旋藻多糖对体液免疫功能的影响

螺旋藻多糖高、中剂量组溶血空斑数(x 103个/全脾)与对照组相比,有显著性差异(P <0.01) ,在血清溶血素试验中抗体积数,在统计上虽无显著性差异,但数据显示低、中、高剂量有增加趋势,且睛剂量组与对照组比较, P值为0.053。结果(见表3)。提示本实验条件下对抗体生成细胞有明显促进作用,有增加体液中补体释放趋势。

表3 螺旋藻多糖对体液兔疫功能的影响

2.4 螺旋藻多糖对单核巨噬细胞吞噬功能的影响

样品各剂量组碳廓清能力吞噬指数a与对照组比较,均无显著性差异(P>0.05) ,提示本实验条件下螺旋藻多糖对小鼠碳廓清能力无提高作用。样品各剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数与对照组比较,均无显著性差异(P>0.05) ,结果(见表4)。提示本实验条件下螺旋藻多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无增强作用。

表4螺旋藻多糖对单核巨噬细胞吞噬功能的影响

表5螺旋藻多糖对NK细胞功能的影响(0±5)

2.5 螺旋藻多糖对NK细胞功能的影响

与对照组相比,样品高剂量组均能提高NK细胞活性,且有显著性差异(P<0.05) ,结果(见表5)。提示在本实验条件下螺旋藻多糖对NK细胞活性有促进作用。

免疫是机体免疫系统对异物或抗原性物质进行特异性或非特异性识别和清理的一种生理学功能。人体的免疫系统由免疫细胞、免疫分子和免疫器官构成,它们相互配合完成特异性免疫和非特异性免疫。细胞免疫和体液免疫属于特异性免疫腹腔巨噬细胞吞噬能力和NK细胞功能属于非特异性免疫。本实验中DTH试验和小鼠脾淋巴细胞转化试验代表细胞免疫功能,抗体生成细胞试验和血清溶血素试验代表体液免疫功能,小鼠碳廓清能力和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验代表单核-巨噬细胞吞噬功能, NK细胞活性测定代表NK细胞功能。

本实验结果表明螺旋藻多糖能提高抗体生成细胞数、NK细胞活性有显著作用,结果提示螺旋藻多糖对小鼠的体液免疫和NK细胞活性均有增强作用。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版) , 提示该样品具有增强免疫力功能,但其增强免疫功能的机制和分子基础尚需进一步研究。