1.1试验设计

共选取108头28日龄的长白断奶仔猪将其分为3个组:36头NBW仔猪(初生重为1.5-1.8kg)作为NBW组，其初始体重为(7 90+0.31) kg;36头L BW仔猪(初生重为0.7-1.0 kg)作为LBW组其初始体重为(5 67+0 54) kg;36头LBW仔猪(初生重为0.7-1.0 kg)作为AOS组其初始体重为(566+0 55) kg。LBW仔猪从体况接近、胎次相近和产期一致的72头 母猪所产的新生仔猪中选取各组内仔猪公母比例一致。NBW组和LBW组饲喂基础饲粮，AOS组在基础饲粮中添加500 mg/kg AOS。每组设6个重复，每个重复6头猪。试验期28 d。试验猪只自由采食与饮水，按养殖场标准免疫程序进行免疫接种。

参照NRC(2012)中生长猪5-7 kg阶段营养标准设计能够满足试验猪只营养需要的基础饲粮其组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.2样品采集

试验第28天仔猪禁食8 h后称重，从每组的每个重复中选取1头接近平均体重的仔猪共18头,前腔静脉采血，室温静置30 min后1 500xg离心10min，将收集到的血清分装于1.5 mL离心管中,-20℃保存。采血后将仔猪屠宰取约1 cm长的十二指肠、空肠、回肠组织固定于4%多聚甲醛中;取约10 cm的回肠中段组织刮取肠黏

膜，-80℃保存。

1.3指标测定

1.3.1饲粮营养成分

参照GB/T 6432-2018方法测定饲粮中粗蛋白质含量，参照GB/T 6437-2018方法测定饲粮中总磷含量参照GB/T 13885-2017方 法测定饲粮中钙含量。根据饲料原料中养分含计算消化能以及全消化道标准可消化磷、标准回肠可消化赖氨酸、标准回肠可消化蛋氨酸、标准回肠可消化色氨酸。

1.3.2生长性能

分别在试验开始当天和试验第28天07 :00称取每头仔猪的重量分别记录为初重和末重计算平均日增重(ADG);每天记录采食量、余料量以及腹泻情况，计算平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和腹泻率。

1.3.3血清生化、抗氧化和免疫指标

严格按照试剂盒(南京建成生物工程研究所产品)说明书检测血清中葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、LDL-C、 甘油三酯(TG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、两二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)。严格按照酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(湖南科航生物有限公司产品)测定血清中肿瘤坏死因子a(TNF -a)、白细胞介素6(1L-6)、白细胞介素10(1L-10)含量。

1.3.4肠道组织形态

取固定好的十二指肠、空肠、回肠肠段，用石蜡包埋后制成切片,使用苏木精伊红染色在显微镜下观察绒毛形态测定绒毛稿度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值。

1.3.5回肠黏膜中紧密连接相关基因表达

采用实时荧光定量PCR方法测定回肠黏膜中紧密连接相关基因闭锁小带蛋白-1(Z0-1)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、 闭合蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量。取-80℃冻存的回肠黏膜组织每15-25 mg加入0.5 mL Trizol,在超净台内进行总RNA的提取。使用Evo M-MLV反转录试剂盒(湖南艾科瑞生物工程有限公司)合成cDNA。PCR所用引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表2。使用SYBR Green Pro Taq HS预混型qPCR试剂盒(湖南艾科瑞生物工程有限公司)进行实时荧光定量PCR检测。反应体系为10μL:5 μL SYBR Green Pro Taq HS Premix、1μL cDNA、0.2 μL.上游引物、0.2 μL下游引物和3.6 μRNA酶水。以甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，目基因mRNA相对表达量的计算使用2- C方法。

1.3.5回肠黏膜中紧密连接相关基因表达

采用实时荧光定量PCR方法测定回肠黏膜中紧密连接相关基因闭锁小带蛋白-1(Z0-1)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量。取-80℃冻存的回肠黏膜组织每15~ 25 mg加入0.5 mL Trizol,在超净台内进行总RNA的提取。使用Evo M-MLV反转录试剂盒(湖南艾科瑞生物工程有限公司)合成cDNA。PCR所用引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列见表2。使用SYBR Green Pro Taq HS预混型qPCR试剂盒(湖南艾科瑞生物工程有限公司)进行实时荧光定量PCR检测。反应体系为10 μL:5 μL SYBR Green Pro Taq HS Premix、1 μL cDNA、0.2 μL.上游引物、0.2 μL下游引物和3.6 μ无RNA酶水。以甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，目基因mRNA相对表达量的计算使用2- C方法。

表2 引物序列信息

1.4数据统计与分析

所有试验数据由Excel 2021整理后用SPSS 25 0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),选用Duncan氏法进行多重比较，结果以平均值t标准差表示，P<0.05表示差异显著,0.05≤P<0.10表示差异有显著趋势。

2.1 AOS对LBW断奶仔猪生长性能的影响

由表3可知,LBW组仔猪的初重、末重、平均日增重、平均日采食量均显著低于NBW组(P<0.05),但与AOS组相比差异不显著(P>0.05);仔猪料重比各组之间无显著差异(P>0.05);AOS组仔猪腹泻率较L BW组有降低趋势(P=0089)。

表3 AOS对LBW断奶仔猪生长性能的影响

2.2 AOS对LBW断奶仔猪血清生化指标的影响

由表4可知,AOS组仔猪血清中LDL-C含量显著低于L BW组(P<005),与NBW组无显著差异(P>0 05);AOS组、NBW组仔猪血清中HDL-C含量较L BW组有下降趋势(P=0.099);仔猪血清中GLU、TC、 HDL-C、 TG含各组之间无显著差异(P>0.05)。

表4  AOS对LBW断奶仔猪血清生化指标的影响

2.3 AOS对LBW断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

由表5可知，AOS组仔猪血清中CAT活性和T-AOC较L BW组显著增加(P<0 05),与NBW组相比无显著差异(P>0 05);AOS组仔猪血清中SOD活性显著高于LBW组和NBW组(P<0.05);仔猪血清中MDA含量在各组之间无显著差异(P>0.05)。

表5  AOS对LBW断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

2.4 AOS对LBW断奶仔猪血清免疫指标的影响

由表6可知，AOS组仔猪血清中IL-6、TNF-a含量显著低于LBW组(P<0.05),与NBW组相比无显著差异(P>0.05);AOS组仔猪血清中IgM含量显著高于LBW组和NBW组(P<0.05);仔猪血清中IL-10、IgA、 lgG含 各组之间无显著差异(P>0.05)。

表6  AOS对L BW断奶仔猪血清免疫指标的影响

2.5 AOS对LBW断奶仔猪肠道上皮屏障的影响

图1所示为各组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠组织切片，通过组织切片统计各肠段的绒毛高度、隐窝深度计算绒毛高度/隐窝深度比值。由表7可知,AOS组仔猪十二指肠绒毛高度与LBW组相比有增加趋势(P=0 063);AOS组仔猪空肠和回肠绒毛稿度和绒毛高度/隐窝深度比值较L BW组显著增加(P<005),与NBW组差异不显著(P>0.05)。

图1 各组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠组织切片

由表8可知，与LBW组相比AOS组仔猪回肠黏膜中ZO- 1和Occludin mRNA相对表达量显著增加(P<0.05);AOS组仔猪回肠黏膜中Claudin-1 mRNA相对表达量显著高于LBW组和NBW组(P<0 .05);L BW组仔猪回肠黏膜中ZO-1和Occludin mRNA相对表达量较NBW组显著降低(P<0.05)。

表7  AOS对LBW断奶仔猪肠道组织形态的影响

表8  AOS对LBW断奶仔猪回肠黏膜中紧密连接相关基因表达的影响

AOS具有抗炎、抗氧化、抗菌、改善肠道健康等多种生物活性。本试验研究了AOS对L BW断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能以及肠道上皮屏障的影响，研究发现在L BW断奶仔猪饲粮中添加500 mg/kg AOS对其平均日采食量和平均日增重无显著改善作用,但可使其的腹泻率有所降低(未达显著水平):AOS能显著降低L BW断奶仔猪血清中LDL-C含量以及促炎细胞因子儿L-6、TNF-a含量增加血清中IgM含量增强机体免疫功能；AOS能显著提高L BW断奶仔猪血清中CAT、SOD活性与T-AOC提高抗氧化能力;AOS能改善L BW断奶仔猪肠道组织形态和促进肠道紧密连接蛋白基因的表达，维持肠道健康。从本研究结果看尽管AOS未显著提升LBW断奶仔猪的生长性能，但在一定程度改善了其健康状态，我们推测延长试验周期可能会对L BW断奶仔猪的生长性能有提高作用，但这需要进一步证实。

本研究发现饲粮中添加AOS对LBW断奶仔猪的生长性能没有显著影响,但其在抗氧化能力、免疫功能、肠道上皮屏障功能上具有一定改善作用。其原因可能是,LBW仔猪较NBW仔猪机体器官发育迟缓，对营养物质吸收利用能力和健康状态较弱短时间内AOS对其血液和肠道指标的改善无法进一步对其生长性能产生显著影响。也有研究表明,LBW仔猪断奶应激导致的线粒体自噬障碍、抗氧化功能下降、炎症损伤与NBW仔猪相比更加显著导致AOS对L BW仔猪生长性能的改善效果不如在NBW仔猪上显著。

氧化应激产生的主要原因是自由基的产生过多或清除不足。MDA是氧化应激的标志产物，SOD和CAT是可以清除体内过多自由基的内源性抗氧化酶。T-AOC是指各种抗氧化物质和抗氧化酶构成的总抗氧化水平。Zhang等[ 171研究发现,LBW仔猪的抗氧化能力显著低于NBW仔猪。研究表明，AOS能有效抑制氧化应激,帮助机体抵抗氧化应激引起的疾病。Wan等[ 19]在NBW仔猪上的研究发现饲粮中添加AOS能显著增加断奶仔猪血清中CAT活性和T-AOC增强其抗氧化能力。本研究探究了AOS对L .BW断奶仔猪抗氧化能力的影响，结果显示L BW仔猪血清中MDA含量较NBW仔猪有增加趋势表明L BW仔猪的氧化应激在一定程度上高于NBW仔猪。在饲粮中添加AOS的L BW仔猪血清中CAT、SOD活性和T-AOC显著增加，这表明AOS能增强L BW断奶仔猪的抗氧化能力，改善机体健康。

炎症是一种保护性免疫反应，通过消除受损细胞、刺激物、病原体等有害刺激物来维持组织内稳态。研究表明,机体免疫反应失调会促进LDL-C的积累.AOS可通过调节低密度脂蛋白受体(LDL R)的表达降低血清中LDL-C含量。HDL-C在 免疫反应中发挥抗炎作用,炎症发生时会改变自身结构结合促炎物质。本研究发现，饲粮中添加AOS能够显著降低L BW断奶仔猪血清中LDL-C含量，饲喂基础饲粮的NBW仔猪和饲喂添加AOS饲粮的L BW仔猪血清中HDL-C含量有低于饲喂基础饲粮的L BW仔猪的趋势，表明AOS可能通过调节LBW仔猪血清中LDL-C、HDL-C的含 量来减轻炎症损伤。机体炎症反应情况与体内促炎细胞因子与抗炎细胞因子的相对水平有关,促炎细胞因子过多有助于自身免疫性炎症的发生和传播。研究表明，AOS能抑制脂多糖诱导的促炎细胞因子的产生。本研究中,LBW仔猪血清中L-6、TNF-a含 量较NBW仔猪显著增加，但AOS显著降低了LBW仔猪血清中IL-6、TNF-a含 量，达到与NBW组无显著差异。该结果表明AOS通过降低血清中促炎细胞因子含量来缓解L BW仔猪的炎症,改善机体健康。免疫球蛋白由B淋巴细胞分泌能够识别与抵御细菌、病毒等外来物质。IgM是机体免疫系统中最早产生的抗体类型之一，能够激活免疫细胞，参与免疫应答的启动。本研究发现,AOS组仔猪血清中IgM含量显著增加表明AOS能增强B淋巴细胞的免疫反应。以上结果表明,AOS能通过增强LBW断奶仔猪的免疫功能来改善机体健康。

①AOS能降低LBW断奶仔猪血清中LDL和促炎细胞因子L-6、TNF-a含量,增加血清中IgM含量，进而增强机体的免疫功能。

②AOS能提高LBW断奶仔猪血清中CAT、SOD活性与T-AOC，进而增强机体的抗氧化能力。

③AOS能通过改善肠道组织形态和促进肠道紧密连接相关基因的表达来维持L BW断奶仔猪肠道上皮屏障完整性。

④综上所述,AOS可增强LBW断奶仔猪的抗氧化能力、免疫功能和肠道上皮屏障完整性，进而改善机体健康。